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[摘要] 目的 探讨脐带血白细胞介素1受体相关激酶-M（interleukin-1 receptor-associatd kinase-M，IRAK-M）基因多态性与新生儿早产及主要并发症的关系。 方法 选择 2015 年1月～2017 年 12 月本院出生的≤34 周的早产儿 200例为研究对象，母亲分娩时取脐带血，测定 IRAK-M基因位点多态性;记录早产儿的临床资料，分析 IRAK-M基因多态性与早产儿主要并发症的关系。 结果 200例早产儿中主要住院情况有创机械通气治疗、吸氧治疗、肺表面活性物质应用、低血压或休克、败血症、发生呼吸暂停。早产儿的IRAK1主要基因分型为 rs3027898 （CC、AC 或AA3 种基因型）和rs1059703（CC、CT或TT3种基因型）。rs3027898（AC+AA）和rs1059703（CT+TT）增加了RDS的发生率，rs3027898（AC+AA）增加了ROP发生率，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 测定脐带血IRAK-M基因多态性可以影响早产儿的主要并发症，有助于评估患儿预后。
[关键词] 白细胞介素1受体相关激酶-M;多态性;早产;脐带血
[中图分类号] R722.6 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2019）20-0019-04
Relationship between polymorphism of cord blood IRAK-M gene and premature neonate as well as major complications
HUANG Jun WANG Lizhen
Department of Neonatology， Taizhou Hospital in Zhejiang Province， Linhai 317000， China
[Abstract] Objective To investigate the relationship between polymorphism of interleukin-1 receptor-associative kinase-M（IRAK-M） gene and premature delivery as well as major complications in neonates. Methods A total of 200 premature infants（≤34 weeks） born in our hospital from January 2015 to December 2017 were eolled. The cord blood was taken when the mother gave birth. And the IRAK-M locus polymorphism was determined. The clinical data of premature infants were recorded and the relationship between IRAK-M gene polymorphism and major complications in preterm infants was analyzed. Results The main hospitalizations in 200 preterm infants were invasive mechanical ventilation， oxygen therapy， pulmonary surfactant application， hypotension or shock， sepsis， and apnea. The main genotype of IRAK1 in premature infants is rs3027898（CC， AC or AA genotypes） and rs1059703（CC， CT or TT3 genotypes）. rs3027898 （AC+AA） and rs1059703 （CT+TT） increased the incidence of RDS， and rs3027898 （AC AA） increased the incidence of ROP， and the difference was statistically significant（P<0.05）. Conclusion Measuring IRAK-M gene polymorphism in cord blood can affect the main complications of premature infants and help to assess the prognosis of children.
[Key words] Interleukin-1 receptor-associated kinase-M; Polymorphism; Premature delivery; Cord blood
白細胞介素1受体相关激酶（interleukin-1 receptor-associatd kinase-M，IRAK-M）是近年来发现的参与机体先天性免疫反应过程的关键丝/苏氨酸激酶，IRAK家族通过一系列的级联反应，参与调解TOLL样受体（toll like receptor，TLR）L/IL-1受体家族信号转导通路，识别病原相关分子模式，能在IL-1诱导下和 IL-1R 相结合[1]。IRAK-M 还调节获得性免疫的发生和类型，从而构成机体内的第一道免疫防线，可参与调节多种炎性疾病的发生发展[2，3]。但目前针对白细胞介素1受体相关激酶-M（IRAK-M）基因多态性与早产儿及主要并发症的关系研究较少。本研究通过检测临床孕妇脐带血IRAK-M+22148G>A多态位点的基因型，进一步探讨IRAK-M基因多态性与新生儿早产及并发症的关系，为新生儿并发症的早期诊断和预后判定提供依据，为精准医疗提供临床证据。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择 2015 年1月～2017 年 12 月本院出生的早产儿200例为研究对象，纳入标准：（1）单胎早产儿;（2）孕周≤34周。排除标准：（1）已知的先天性畸形，如先天性心脏病、先天性神经管发育异常等;（2）21- 三体综合征、18-三体综合征等，以及明显的面容异常伴有掌指纹异常者;（3）双胞胎或多胎。早产儿法定监护人了解本研究过程，并签署书面同意书。
1.2 基因多态性测定
患儿均于脐带结扎后立即取脐动脉血 5 mL注入抗凝管中提取白细胞基因组 DNA（AXYGEN 公司AxyPrep-96全血基因组 DNA 试剂盒），-80℃保存备用。
IRAK-M 基因引物：上游引物序列：5’-AGTGGAACTGATGTCCTGTGACAG-3’;下游引物序列：5’-GCAACACATTGACCTAATGACCAG-3’。
1.3 rs3027898和rs1059703多态性分析
①引物及探针合成：rs3027898上游引物5"-AAAACCTGACACGGGAAGTG-3";下游引物5"-GTGACGTCCAGGTTGTCCTT-3"。rs1059703上游引物 5"-TCCACTTGCAGGTGTACGAG -3";下 游 引 物5"-GCC-TCTCTGCAGCTGCTCT -3"。②PCR 扩增目的基因。③连接酶检测反应。④测序反应：以 ABIPRISM377 DNA Sequencer测序仪测定LDR产物序列长度后，经Genelnapper数据分析而得出SNP基因型分型结果。
1.4 观察指标
1.4.1 产妇 观察孕周、分娩方式。
1.4.2早产儿 性别、体质量、5 min Apgar评分、住院情况及主要并发症、结局（死亡和未死亡）。
1.4.3 主要并发症 包括新生儿呼吸窘迫综合征（RDS）、支气管肺发育不良（BPD）、坏死性小肠结肠炎（NEC）、早产儿视网膜病（ROP）Ⅲ～Ⅴ期、脑室周围-脑室内出血（PIVH）Ⅲ～Ⅳ级。
1.4.4 死亡病例 住院时间超过 72 h因病情严重而放弃治疗，且放弃治疗后 8 h 内死亡的早产儿;不包括家属要求姑息治疗且生后 24 h 内死亡的早产儿。
1.5 统计学方法
采用SPSS22.0统计学软件进行数据处理，满足正态分布的计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以率或构成比表示，采用χ2检验，各基因多态性与早产儿主要并发症的关系先采用单因素Logistic回归分析。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 早产儿一般资料及主要结局
200例早产儿中男109例，女91例，孕周（30.32±2.39）周，出生体质量为（1770.8±632.1）g。分娩剖宫产占46.50%，5 min Apgar评分平均（7.62±1.34）分，主要住院情况中有创机械通气治疗占36.5%，吸氧治疗平均天数（16.38±3.51）d，肺表面活性物质应用占85.50%，低血压或休克平均次数（9.33±2.82）次，败血症占21%，发生呼吸暂停的平均次数为（11.62±3.56）次，主要并发症包括RDS 143例（71.5%）、BPD 43例（21.5%）、NEC 51例（25.5%）、ROP62例（31.0%）、PIVH137例（68.5%），死亡16例（0.80%）。
2.2 基因多态性改变
早产儿的IRAK1主要基因分型为 rs3027898（CC、AC 或AA3 種基因型）和rs1059703（CC、CT 或 TT3 种基因型）。见表1。
表1 早产儿rs3027898 和rs1059703基因多态性改变[%（n/n）]
2.3 rs3027898 和rs1059703基因型与早产儿主要并发症的关系
经单因素和多因素Logistic回归分析，rs3027898（AC+AA）和rs1059703（CT+TT）增加了RDS的发生率，rs3027898（AC+AA）增加了ROP发生率，差异有统计学意义（P<0.05），见表2、3。
3 讨论
早产儿又称未成熟儿，是指胎龄小于37周，体重小于2500 g、身长小于47 cm的活产新生儿。调查显示，世界范围内早产儿的发生率为9.6%，我国早产儿的发生率为5%～10%，死亡率为12.7%～20.8%。国外报道胎龄越小、体重越低、死亡率越高，并且早产儿的孕周及出生体质量越低，神经系统疾病和肺损伤等远期后遗症越明显。早产儿发育过程中出现的远期后遗症甚至可造成成年期的生活存在一定困难，对个人、家庭和社会均带来很大的负担，严重影响人口素质和生活质量。随着现如今医疗技术的提高，早产儿的存活率逐渐上升，但因其自身发育并不完全，并发症并未发生明显减少，已成为一个重要的社会问题[4，5]。据报道，50%的自发性早产与孕妇宫内感染密切相关，宫内感染既可导致早产，又可对早产儿产生不良影响， 应引起足够的重视，宫内感染与新生儿后期发生神经系统疾病及宫外生长发育迟缓有一定的相关性。发生宫内感染的孕妇容易诱发胎膜早破和早产，其主要原因是大肠埃希菌、 无乳链球菌等可产生分解胎膜胶原蛋白的磷脂酶 A，破坏胎膜结构，胎膜早破导致产道的正常防御机制被破坏，病原体逆行引起羊水和绒毛膜羊膜炎，胎儿接触或吞噬感染的羊水后发生感染。宫内感染后，子宫 NK 细胞（ uNK 细胞） 显著增加，肾上腺通过 ACTH 和超氧化物介导的Caspase-1 能诱导炎症细胞因子的异常分泌，机体内免疫应答Th1与Th2 的是否平衡直接影响着胎儿发育，其介导的炎症反应在早产中起重要作用[6-8]。在抗原刺激下，Th 细胞前提分化为Th0 细胞，Th0 细胞在病原菌感染的作用下选择性地向有害作用 Th1分化，导致滋养层细胞死亡造成流产[9-11]。
IRAK-M 是白介素-1 受体相关激酶（IRAKs）家族成员之一，是 TLR 与胞质内 TRAF6 之间的衔接分子， IRAK-M 主要在外周血白细胞内表达，只有在单个核细胞内才能检出，分布具有高度特异性[12，13]。研究表明，IRAK-M可能通过促进IRAK-1、IRAK-4 与 My D88 的结合，引起 NF-κB激活，导致免疫反应相关 TNF-α 和 IL-8 等基因表达增加;IRAK1 还可以选择性活化 STAT3 而抑制 NFAT，减少Th 细胞向 Treg细胞分化，负性调节TLRs 介导的信号通路[15-17]。IRAK1 基因在3’UTR和外显子区域分别存在rs3027898和 rs1059703多态性位点，当其突变时可明显促进NF-κB激活，调节机体内的炎症感染[18-20]。激活后的淋巴细胞产生大量炎症因子，相互作用，导致细胞因子的数量不断增加而形成一个巨大的细胞因子网络体系，使炎症反应不断扩大，产生 “炎症瀑布”，当超出机体代偿能力时，机体内出现过度炎症反应，引起广泛组织细胞损伤，产生炎症反应综合征。本研究结果表明，早产儿的IRAK1主要基因分型为 rs3027898（CC、AC 或AA3 种基因型）和rs1059703（CC、CT 或 TT3 种基因型）。其中rs3027898（AC+AA）和rs1059703（CT+TT）增加了RDS的发生率，rs3027898（AC+AA）增加了ROP发生率，说明脐带血IRAK-M基因多态性與孕妇早产及主要并发症具有明显的相关性。
综上所述，测定脐带血IRAK-M基因多态性可以影响早产儿的主要并发症，有助于评估患儿预后。同时，既往作为医疗废物的脐带血可以充分利用，尤其是对于可能患多种并发症的早产儿来说，更具有可利用的价值。
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