洪占梅，熊晓莉，肖俊萍，高慧，章芳琴，叶喜德*（.中国人民解放军联勤保障部队第九〇一医院药剂科，合肥 00；
.江西中医药大学药学院，南昌 0004；
.南昌大学第一附属医院药剂科，南昌 0006）
远志为远志科植物远志Polygala tenuifoliaWilld.或卵叶远志Polygala sibiricaL. 的干燥根[1]，主产于山西和陕西，性温，味苦。传统用药常以远志根皮入药，具有镇静安神、祛痰消肿等功效，多用于治疗失眠多梦、健忘等证。现代研究发现远志中寡糖酯、酮和皂苷类等成分对远志镇静安神及神经保护等药效产生影响[2]。而不同产地远志药材所含化学成分的含量存在差异[3-4]，其中山西产远志药材中寡糖酯和酮类成分含量高且品质优。而当前对不同产地远志成分的含量研究多集中于采用HPLC法测定寡糖酯、酮和皂苷类等成分的含量[5]。2020年版《中国药典》以远志酮Ⅲ、3，6"-二芥子酰基蔗糖和细叶远志皂苷为目标成分，应用反相色谱ODS柱及甲醇-0.05%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱，并按照HPLC法进行含量测定。另一方面，远志质量优劣，常与抽芯程度有关。所谓抽芯程度是指同一批远志抽芯所占比率，在一定程度上代表远志等级，这与远志传统用药习惯“去芯”有关，认为远志芯是远志的主要毒性部位。由于远志抽芯困难，故远志的抽芯程度越高，商品等级越高[6]。但现代研究发现，远志可不去芯，远志芯中的化学成分与远志筒相近，只是含量较低，且去芯可能更易导致远志发霉，从而导致黄曲霉毒素超标[7]。基于此，本文研究远志不同产地、不同抽芯程度对其所含西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志酮和3，6’-二芥子酰基蔗糖等4种成分含量的影响，并比较它们之间的差异，为深入研究远志提供数据支撑。
1100型高效液相色谱系统（安捷伦公司），DFY-400型400克摇摆式高速中药粉碎机（温岭市林大机械有限公司），KQ-500E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），TGL-16B高速离心机（上海安亭科学仪器厂），十万分之一电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司），娃哈哈纯净水。对照品西伯利亚远志糖A5（批号：MUST-21052704）、西伯利亚远志糖A6（批号：MUST-20082523）、远志酮（批号：MUST-19092310）（纯度＞94.0%）（成都曼斯特生物科技有限公司）；
3，6"-二芥子酰基蔗糖（批号：wkq 21031112）（纯度＞99.0%，四川省维克奇生物科技有限公司）；
除乙腈为色谱纯外，其他试剂均为分析纯。
本研究所用远志药材来源于陕西和山西两地，详见表1，经江西中医药大学药学院中药鉴定教研室刘应蛟副教授鉴定为远志（Polygala tenuifoliaWilld）的干燥根。
表1 12批远志来源信息Tab 1 12 batches of Polygala tenuifolia source information
2.1 供试品溶液的制备
取不同产地远志药材20 g，粉碎，过60目筛，各取0.5 g粉末，精密称定，置于锥形瓶中，加入60%甲醇25 mL，称定重量，超声45 min。静置冷却后，再称定重量，用60%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取滤液，置于25 mL量瓶中，定容至刻度。转移至离心管内，5000 r·min-1下离心5 min，取上清液，微孔滤膜过滤后，得供试品溶液。
2.2 对照品溶液的制备
取西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志酮各1 mg，3，6"-二芥子酰基蔗糖2 mg，于5 mL量瓶中用纯甲醇定容，制成对照品储备液。分别从各对照品储备液中精密吸取适量配制成西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志酮质量浓度均为0.05 mg·mL-1，3，6"-二芥子酰基蔗糖质量浓度为0.2 mg·mL-1的混合对照品溶液，逐级稀释，得混合对照品系列溶液。
2.3 色谱条件[8]
采用Syncronis C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 µm），柱温35℃，流速1 mL·min-1，进样量10 μL，检测波长320 nm，流动相为乙腈（A）-0.05%磷酸溶液（B），梯度洗脱（0～8 min，8%～15.5%A；
8～22 min，15.5%～18%A；
22～30 min，18%～20%A；
30～50 min，20%～24%A；
50～73 min，24%～33%A；
73～85 min，33%～42%A）。在上述色谱条件下，各成分间分离度良好，分离度均大于1.5，见图1。
图1 远志中4种成分HPLC色谱图Fig 1 HPLC chromatograms of 4 components in Polygala tenuifolia
2.4 线性关系考察
取混合对照品系列溶液，西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志酮质量浓度分别为5、10、15、25、40、50 μg·mL-1，3，6’-二芥子酰基蔗糖质量浓度分别为20、40、60、100、160、200 μg·mL-1，按“2.3”项下色谱条件进行测定，记录各成分峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，以信噪比（S/N）为10时计算定量限，结果见表2。
表2 远志中4种成分的标准曲线和线性范围Tab 2 Standard curve and linearity of 4 components in Polygala tenuifolia
2.5 精密度试验
精密吸取远志混合对照品溶液，按“2.3”项下色谱条件进样10 μL，重复6次，记录并计算对照品中西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志酮、3，6"-二芥子酰基蔗糖成分峰面积RSD值，其结果分别为1.9%、1.9%、1.1%、1.6%，表明仪器精密度良好。
2.6 重复性试验
取同一批远志药材粉末6份，精密称定，按照“2.1”项方法制备，按照“2.3”项下色谱条件进样测定，计算西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志酮、3，6"-二芥子酰基蔗糖峰面积RSD值，其结果分别为2.1%、2.2%、2.3%、1.8%，表明该方法重复性良好。
2.7 稳定性试验
取同一批远志供试品溶液适量，于室温下分别在0、2、4、8、12 h，按“2.3”项下色谱条件进样测定，计算峰面积RSD值。结果西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志酮、3，6"-二芥子酰基蔗糖峰面积RSD分别为1.1%、2.0%、1.7%、1.6%，表明供试品在12 h内稳定。
2.8 加样回收试验
精密量取已知成分含量的远志供试品溶液（批号：S1）1 mL，加入低、中、高浓度的混合对照品溶液1 mL，每个浓度取3份，置于5 mL量瓶中，定容，在“2.3”项色谱条件下进样，测定西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志酮、3，6"-二芥子酰基蔗糖的平均回收率。结果4种成分的低、中、高浓度的平均回收率在94.8%～106.8%，RSD在0.47%～2.0%。
2.9 样品含量测定
取各批次样品，按“2.1”项下方法进行制备，按照“2.3”项下色谱条件进行检测，记录峰面积，计算供试品中各成分含量，结果见表3。
表3 不同远志中4种成分含量测定结果(mg·g-1)Tab 3 Determination of 4 components in different Polygala tenuifolia (mg·g-1)
2.10 统计分析
采用 SPSS 23.0 软件分析，计量资料以±s表示，采用t检验进行组间比较，以P＜0.05为差异具有统计学意义。
2.10.1 4种不同成分含量聚类分析 将12份不同产地、不同抽芯程度远志药材中西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志酮和3，6"-二芥子酰基蔗糖4种成分含量数据输入SPSS 23.0统计软件中进行聚类分析。在分析过程中主要以远志药材中各成分含量的相似度进行分类。结果表明，12批远志样品首先可聚为两个大类，S5、S9、S10聚为一大类，其他可聚为另一大类，见图2。在第一大类中，S5单独为一小类，S9、S10聚为一小类；
在第二大类中，可分为4个小类，S1、S2、S7、S8聚为一小类，S3、S11、S6聚为一小类，S12与S4单独各为一小类。
图2 12批远志的聚类分析树状图Fig 2 Cluster analysis of 12 batches Polygala tenuifolia
2.10.2 4种成分含量差异分析 由表3可知，不同产地、不同抽芯程度远志药材4种成分含量存在显著差异。西伯利亚远志糖A5含量为0.787～2.193 mg·g-1，以山西未抽芯大筒远志含量最高，为2.193 mg·g-1，其次为陕西未抽芯大筒远志，含量为2.129 mg·g-1，与其他不同产地、不同抽芯程度远志药材存在显著性差异（P＜0.05）。相同产地、不同抽芯程度远志中西伯利亚远志糖A5含量无显著差异，以山西抽芯98%中筒远志与抽芯90%大筒远志含量最为接近。
西伯利亚远志糖A6含量为0.627～1.574 mg·g-1，以陕西未抽芯大筒远志含量最高，为1.574 mg·g-1，其次为山西未抽芯大筒远志，含量为1.195 mg·g-1，与其他不同产地、不同抽芯程度远志存在显著差异（P＜0.05）。相同产地、不同抽芯程度远志中西伯利亚远志糖A6含量无显著差异，以山西抽芯95%与抽芯98%中筒远志中西伯利亚远志糖A6含量最为接近。
3，6"-二芥子酰基蔗糖含量为1.976～8.465 mg·g-1，以陕西未抽芯大筒远志含量最高，为8.465 mg·g-1，其次为陕西抽芯98%大筒远志，含量为6.807 mg·g-1，与其他不同产地、不同抽芯程度的远志存在显著差异（P＜0.05）。相同产地、不同抽芯程度远志中3，6"-二芥子酰基蔗糖含量无显著差异，以陕西抽芯98%大筒远志与抽芯95%小筒远志含量最为接近。
3.1 远志药材及测定指标的选择
目前，我国的远志药材主要分布于山西、陕西、河北和山东等地，以山西和陕西为主要产地。在远志多指标成分含量研究中，对山西、内蒙、陕西等地的糖酯类指标成分进行研究，结果表明山西远志药材成分含量较高，整体品质较好[9]。因此，本研究选用山西和陕西两地不同抽芯程度的远志药材进行成分含量研究。在选择测定指标方面，大量研究表明，远志中寡糖酯类和酮类成分与远志药效相关，因此对不同产地远志药材进行成分含量测定时，常以远志酮、3，6"-二芥子酰基蔗糖为测定指标。另外，参考文献[10]对远志药材中西伯利亚远志糖A5和西伯利亚远志糖A6进行含量测定，分析远志药材成分含量的差异性。因此，在本研究中选用西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志酮和3，6"-二芥子酰基蔗糖4种成分进行研究。
由含量测定结果可知，山西未抽芯大筒远志中西伯利亚远志糖A5含量比抽芯者高，陕西抽芯98%大筒远志中西伯利亚远志糖A6含量最高，山西未抽芯大筒远志中远志酮含量最高，陕西未抽芯远志中3，6"-二芥子酰基蔗糖含量最高，表现为整体质量优、品质佳。
3.2 测定条件的筛选
2020年版《中国药典》远志的含量测定中，采用70%甲醇对远志粉末进行超声提取，残渣加10%氢氧化钠加热回流，盐酸调节pH值，正丁醇振摇提取等方式制备供试品溶液。本研究在设计供试品的制备方法阶段对超声提取和回流提取方式进行了比较，发现文献[11-12]多采用超声提取进行供试品制备，甲醇浓度在50%～70%，此法提取效率高且用时少，因此，本研究中对远志药材采用超声法提取，提取溶剂为60%的甲醇。对于流动相的选择，文献[13-15]对远志成分含量测定时多采用甲醇-0.05%磷酸溶液（70∶30）为流动相进行梯度洗脱，而在远志指纹图谱研究以及远志质量评价研究中多采用乙腈-0.05%磷酸溶液进行洗脱。本文参考文献并对混合对照品成分进行测定后，采用乙腈-0.05%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱，实现了对西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志酮与3，6"-二芥子酰基蔗糖含量分析测定。
3.3 不同抽芯程度对远志药材的影响
根据远志传统药用经验[16]，远志以根皮入药，药效以“去净木心者”为佳，其中大筒远志质量最优，中筒其次，小筒较次。而在本研究中，对不同抽芯程度远志药材含量进行比较，发现陕西、山西中未抽芯大筒远志西伯利亚远志糖A5成分含量较高，西伯利亚远志糖A6则以陕西98%抽芯大筒远志最高，远志酮以山西未抽芯大筒远志最高，陕西未抽芯大筒远志中3，6"-二芥子酰基蔗糖成分含量最高。历代本草用药，提倡远志去芯。但随着研究不断深入，发现远志不去芯时，毒性和溶血作用比取芯之后的根皮入药时更小[17]，且祛痰作用相近。本研究结果表明，不去芯远志中化学成分含量相对较高，说明去芯会影响远志主要成分含量，这为远志去芯是否影响其药效等方面的深入研究提供了基础。
猜你喜欢芥子远志酰基毛远志书法篆刻作品欣赏延河(下半月)(2019年7期)2019-07-30多出来的空间故事会(2019年1期)2019-01-11材料作文“芥子之灯”导写新世纪智能(语文备考)(2018年11期)2018-12-29毛远志延河(下半月)(2017年8期)2017-09-12N-月桂酰基谷氨酸盐性能的pH依赖性中国洗涤用品工业(2017年2期)2017-04-16再遇芥子园——《芥子园画传》与当代名家对话展宝藏(2017年2期)2017-03-202-氯-4-甲酰基戊腈的合成研究当代化工研究(2016年2期)2016-03-20N-脂肪酰基氨基酸盐的合成、性能及应用中国洗涤用品工业(2016年2期)2016-02-28出入芥子园—精进社第四回展东方艺术·国画(2015年3期)2015-08-20α-甲氧甲酰基-γ-丁内酯和α-乙氧甲酰基-γ-丁内酯的合成及表应用化工(2014年5期)2014-08-08
