【摘 要】目的：探讨肾盂输尿管交界处狭窄患者TGF-β1、β2-微球蛋白含量手术前后变化的临床意义。方法：通过酶联免疫（ELISA）方法检测后腹腔镜肾盂成形术前后患者尿液中的特殊的生物标记因子TGF-β1及β2-微球蛋白的表达。结果：肾盂成型术后的患者其尿液中TGF-β1及β2-微球蛋白的表达与术前相比均明显下降。结论：TGF-β1及β2-微球蛋白是检验肾盂输尿管交界处狭窄手术效果及诊断的可靠指标。
【关键词】肾盂输尿管交界处狭窄；腹腔镜；TGF-β1；β2-微球蛋白
【中图分类号】R69 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2012）12-0027-01
肾盂输尿管连接部梗阻（UPJO）是先天性肾积水的最常见原因之一[1]，其发病机制目前尚不明了，以往对于先天性输尿管肾盂连接部梗阻的诊断及术后恢复的评估都依赖于放射影像学，如静脉肾盂造影、放射性同位素肾造影术等，这些检查都使患者暴露、接触到放射性物质，从而损害其身体健康。因此寻找安全、无创的方法至关重要，本研究检测后腹腔镜肾盂成形术前后患者尿液TGF-β1和β2-微球蛋白的水平变化，现报告如下：
1材料与方法
1.1临床资料
选择我院2010年1月至2012年9月确诊的肾盂输尿管交界处狭窄的住院患者，其中男性10例， 女性 14例； 年龄9岁-39岁，年龄21.8+5.9岁。所有患者入院时均行泌尿系彩超、泌尿系三维重建及肾盂分泌造影检查，无手术禁忌症，分别于术前及术后留取患者的尿液。
1.2 实验材料
酶标板：96孔已包被抗人TGF-β1和β2-微球蛋白单抗、样品稀释液、第一抗体工作液（生物素化的抗人TGF-β1和β2-微球蛋白抗体）、酶标抗体工作液（辣根过氧化物酶标记）、底物稀释液、终止液、洗涤液（双蒸水1：20稀释后应用）、标准品（冻干粉，4000pg/ml）、OPD片、坐标纸、封板纸。
1.3酶联免疫（ELISA）方法检查
1.3.1 取-20℃保存尿样
1.3.2 建立标准曲线：设标准孔8孔，每孔中加入样品稀释液100μL，第一孔中加入标准品100μL，混匀后用加样器吸取100μL移至第二个空，之后如上重复对倍稀释至第七孔，最后从第七孔中吸出100μL弃去，第八孔为空白对照，各孔中体积均为100μL。
1.3.3 加样：待测样品孔中每孔各加入待测样品100μL.
1.3.4 将反应板置于37℃120分钟
1.3.5 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干
1.3.6 每孔种加入第一抗体工作液50μL.
1.3.7 将反应板充分混匀后置37℃60分钟
1.3.8 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干
1.3.9 每孔种加入酶标抗体工作液100μL.
1.3.10 将反应板充分混匀后置37℃60分钟
1.3.11 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干
1.3.12 每孔种加入底物工作液（显色前5-10分钟将OPD片放入5ml底物稀释液中溶解）100μL，置37℃暗处反应5-10分钟.
1.3.13 每孔种加入终止液50μL混匀.
1.3.14 在492nm处测吸光度值。所有OD值减去空白值再计算。
1.3.15 以标准品2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0 pg/ml之OD值在半对数线上作图，画出标准曲线，将浓度作为X轴，OD值作为Y轴，根据样品OD值计算出对应的人（TGF-β1）及β2-微球蛋白含量.
1.4 统计学方法
采用 SPSS10.0 统计软件进行独立样本的 t 检验， 所有检验结果 P < 0.05 为有统计学意义。
2结果
通过酶联免疫（ELISA）方法检测后腹腔镜肾盂成型前后患者尿液中TGF-β1及β2-微球蛋白的表达的影响。发现行肾盂成型术后的患者其尿液中TGF-β1及β2-微球蛋白的表达明显下降（见表1）。
3讨论
肾盂输尿管连接部梗阻（UPJO）是先天性肾积水的最常见原因之一，，伴随输尿管梗阻可产生一系列的病理生理改变。肾盂、肾盏、集合管及肾小管扩张，肾间质水肿，局灶性炎性细胞浸润，间质纤维化，最终导致肾萎缩[2]传统的检查方法对患者均有一定的损害。因此寻找安全、无创的诊断方法已经成为目前研究的热点。
有研究表明TGF-β1是间质纤维化表达过程的关键机制。因此研究其在肾盂输尿管交界处狭窄之中意义重大，最新国内的动物实验也表明，在单侧输尿管梗阻的大鼠模型中，梗阻肾脏中TGF-β1水平逐渐增高[3]。本研究也表明肾盂输尿管交界处狭窄时TGF-β1蛋白的表达明显增高 ，这表明病理性肾积水肾脏TGF-β1表达的改变和肾脏纤维化有一定关系，并且在术后降低，表示及早发现疾病并治疗这一改变是可逆的。
肾小球的功能之一就是选择性滤过血浆蛋白。β2-微球蛋白类的低分子量蛋白质95%由肾小球滤过，约99.9%被近端肾小管重吸收[4]，因此，尿中出现了β2-微球蛋白就表明肾小管的重吸收功能受损[5]。β2-微球蛋白的测量可以评估肾小管的功能。本研究也表明肾盂输尿管交界处狭窄时β2-微球蛋白的表达明显增高 ，这表明此时肾脏受损，并且在术后降低，表示及早发现疾病并治疗这一改变是可逆的。
综上所述，腹腔镜肾盂离断成型术能有效的改善，肾盂输尿管狭窄引起的肾脏的病理改变。
参考文献：
[1] Mei H，Pu J，Yang C，etal，Laparoscopic versus open pyeloplasty for ureteropelvic junction obstruction in children： asystematic reviewandmet a-analysis.JEndourol. 2011；25（5）：727-36.
[2] 林国安，龚以榜.积水性肾萎缩.国外医学，1996，16：104-106
[3] 周健淞 陈刚 吴美等抗纤灵二号方对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的调节作用，中国中西医结合肾病杂志，2008，9（11），961-965
[4] 王林，郭宗远，吴荣德等，先天性肾积水患儿β2一MG、EGF、TGF一β1含量变化及临床意义，山东医药，2005，45（11），18-20
[5] 孙泽英，吴湘，吴嘉慧，等.肾脏疾病患儿的血、尿β2-微球蛋白变化.实用儿科杂志，1996，5：14.
作者简介：
万有贵，男，主任医师，硕士研究生导师， 主要从事微创泌尿外科的研究
通讯作者：
陈博，男，副主任医师，医学博士，主要从事微创泌尿外科的研究
邮箱 ：chenmuxin@126.com
